磁珠法NGS二代测序DNA片段分选试剂盒
【产品介绍】
NGSbead基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理 ，配合精心优化过的缓冲体系，用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选 、纯化。 本产品可适用于各品牌DNA 、RNA建库试剂盒，和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同，片段回收效率和文库大小分布 均与 AMPure XP Beads高度吻合。
【保存方法及注意事项】
l 常温运输。 2-8℃保存 ，效期 一年 。避免冷冻避免冷冻 ！
l 磁珠使用前 须在室温平衡至少30min。
l 80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。
l 进行长度分选时，初始样品体积需≥100μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性 。
l 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
【文库大小分选参考条件】
用 NGSbead构建DNA文库。经过1×NGSbead纯化后，再按表1的条件进行分选，得到不同大小的文库，用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。
表1. 磁珠文库分选推荐比例
|
插入片段平均长度（bp） |
250 |
250-350 |
350-450 |
450-550 |
550-650 |
650-750 |
|
第一轮体积比 |
0.80× |
0.70× |
0.60× |
0.55× |
0.50× |
0.45× |
|
第二轮体积比 |
0.20× |
0.20× |
0.20× |
0.15× |
0.15× |
0.15× |
注意：1.8x bead：所有片段纯化；1.0x bead ：Primers + small amplicons去除；0.65x – 0.25x bead片段分选。
【试剂盒组成】
|
组分 |
100次 |
保存 |
|
PuriMag NGSbead |
5 ml |
2-8℃ |
|
Wash buffer |
80%乙醇（用户自备） |
常温 |
|
Elution buffer |
5 ml |
常温 |
图2. 磁珠法双轮分选流程图
【操作步骤】
1. 准备工作
将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 双轮分选
1）请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀 。
2）根据要求，参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠，涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。
3）室温孵育5min。
4）将离心管短暂离心并置于磁力架中 ，待溶液澄清后（约 5min），小心转移上清到干净的离心管中 。
注意：转移上清时，请勿吸取磁珠即使微量残留都将影响后续文库质量。
5）参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠 。
6）涡旋混匀或移液器吹打10次混匀，室温静置 5min。
7）将离心管置于磁力架中，待溶液澄清后（约 5min），小心移除上清 。
8）保持EP管始终处于磁力架中，加入 200μl新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 s，小心移除上清 。
9）重复步骤 8。
10） 保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚出现龟裂（约 5min）。
注意 ：切记磁珠不要干燥时间太久，磁珠干燥过度将影响纯化效果。
11 ） 将离心管从磁力架中取出，加入适量ddH2O（≥20 μL），涡旋振荡或使用移液器轻吹打充分混匀 。
12 ） 保持EP管始终处于磁力架中，小心吸取上清至干净EP管中，即完成分选。
留言咨询
|
| 温馨提示：苏州北科纳米供应产品仅用于科研，不能用于人体,不同批次产品规格性能有差异。网站部分文献案例图片源自互联网，图片仅供参考，请以实物为主，如有侵权请联系我们立即删除。 |
上一款： 没有了...
