水凝胶纳米医学生物纳米材料北科纳米纳米递送系统纳米酶纳米微球

水凝胶：多孔GelMA

【编号】BK2020121707

【CAS号】cas

【货号】BK2020121707-02

【规格】

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17715390137 / 18101240246 / 18914047343

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数量：

本说明书仅作参考，用户可根据实际情况进行适当调整。
产品组分
组分：多孔 GelMA
质量：0.6gX2
储存及运输
干态:-20℃避光.6个月,可常温运输。溶液:4℃避光,7天;-20℃避光.3个月;溶液反复冻融会影响产品性能,尽量现配现用。
有效日期
生产日期见包装。

所需材料GM-PR系列多孔 GelMA水凝胶产品

PBS（1X)

恒温磁力搅拌水浴锅

0.22 um无菌针头过滤器

10-50 mL无菌离心管

10 mL注射器
1-5 mL移液枪及枪头
LS-1601 系列405nm化平源

操作步骤

步骤	名称	材料	过程
1	溶液配制	GM-PR系列多孔 GellMA 1)向多孔 GelM PBS (1X) 移液枪恒温水浴磁力搅拌器	1)向多孔 GelMA包装瓶中加入10 mL PBS;(瓶内含磁力转子、0.6g多孔 GelMA产品) 2）37℃避光水浴磁力搅拌1h(重要步骤〕制备多孔 GelMA水凝胶前驱体溶液。
2	溶液除菌	0.22 um无菌针头过滤器恒温水浴锅无菌离心管	1将上述溶液立即使用0.22 um无菌针头过滤器除菌(防止降温凝胶化)．37℃避光保温备用。注:如无法一次用完可于冰箱冷藏短期保存(<7 day)。下次使用前于37℃复溶.并振荡20-30s使材料均匀。
3	混合细胞		1收集细胞; 2用无菌前驱体溶液重悬细胞〔多次吹打或振荡}。
4	凝胶固化	移液枪及枪头 LS-1601系列固化光源	1将前驱体溶液加入孔板;96孔板:50~100 uL/孔，48孔板:100~300uL孔，24孔板:300-500 uL/孔 2室温静置2min; 3以LS-1601系列405nm光源贴近孔板辐照10-20以固化水凝胶。注:GM-PR-001辐照时间~175s GM-PR-002辐照时间~15s
5	清洗样品	移液枪及枪头	1）加入培养基，置于37度培养箱中5分钟 2）吸去培养基
6	细胞培养		根据实验设计进行培养基更换、观察拍照等操作

操作步骤（2D细胞培养）

多孔 GelMA水凝胶2D细胞培养操作步骤与3D培养主要步骤一致，只是省去了步骤3混合细胞。步骤6清洗样品完成后即可进行细胞表面种植。

温馨提示：请勿直视固化光源

虽然水凝胶内部也自带孔隙结构，但其孔隙过小，使得包裹细胞进行三维培养及生物3D打印时内部的养物质传输及细胞代谢废物排出不畅，致密的孔隙阻碍了细胞更好的功能化。为了提高水凝胶内细胞与外界的物质交换效率，并为细胞生长增殖提供更多空间，团队持续攻关，成功研制出了高孔隙率GelMA水凝胶

获得数十乃至数百微米孔隙结构，常规做法是通过乳液造孔获得，这些工艺存在稳定性差、操作复杂等缺点。BKNM-GM-PR系列通过材料学颠覆性的设计，其使用体验与常规GelMA材料无任何区别，只需要溶解、光照固化即可轻松获得数百微米孔隙结构水凝胶（图1）。

图1 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶操作流程

01 微观形貌

BKNM-GM-PR系列具有几微米至几百微米的孔道结构以适应不同应用需求。通常三维细胞培养时需要50微米以上的孔隙结构，大的孔隙结构可为细胞提供高效的物质交换通道，也为细胞增殖、生长提供空间，能显著提高细胞的增殖活性。（图2）

图2 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶可控微观孔道结构的激光共聚焦照片

02 细胞培养

BKNM-GM-PR系列多孔水凝胶在细胞培养方面具有优异的性能，通过与GelMA无孔水凝胶对比可以明显看出多孔GelMA水凝胶的优势。两种配方的多孔GelMA水凝胶其内部细胞增殖速率均高于GelMA无孔水凝胶，在培养第7天时出现了数倍的细胞数量差。（图3）

图3 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶内部细胞增殖荧光照片及定量分析

在凝胶表面进行细胞培养时，多孔GelMA同样具有优秀表现，贯通的孔道结构使接种在表面的细胞呈现向凝胶内部迁移的趋势，第9天细胞迁移深度可达约540μm。（图4）

图4BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶表面细胞培养荧光照片（红色为荧光GelMA）

03 水凝胶培养过程稳定性

多孔结构水凝胶其比表面积远大于普通无孔水凝胶，因此，多孔水凝胶在相同基体凝胶强度条件通常比无孔水凝胶降解更快。为了支持长时间的细胞培养，EFL团队通过优化配方，在实现优异细胞增殖性能的同时赋予多孔水凝胶良好的稳定性。通过与普通GelMA无孔水凝胶对比，BKNM-GM-PR系列多孔水凝胶在细胞增殖及凝胶稳定性方面均有更好的表现。（图5）

图5 BKNM-GM-PR系列多孔GleMA水凝胶培养过程稳定性测试数码照片及细胞荧光照片